反相c18色譜柱是在硅膠上或雜化基質顆粒上鍵合了C18鍵合相的色譜填料所裝填的色譜柱,按反相色譜條件進行操作和分離。反相是液相色譜中常使用的分離模式,而C18柱是常使用的反相色譜柱之一。
反相色譜柱的選擇性主要為疏水作用、立體選擇性和氫鍵作用,還有一些二級作用,比如:離子交換、金屬螯合作用等。我們來分析下反相c18色譜柱的表征參數:
1.疏水作用(Hy):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱對進行乙基苯測試,考察乙基苯的保留因子,保留因子越大,柱的疏水作用越強。
2.立體選擇性(TFA):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱對進行阿米替林測試,考察阿米替林的拖尾因子,由于阿米替林特殊的立體結構,拖尾因子越小,色譜柱的立體選擇性越強,同時硅醇基作用較弱。
3.金屬雜質含量(CTF):反相c18色譜柱中會殘留少量的金屬離子,一般金屬離子會與喹啉結構發生螯合作用,導致峰拖尾,故喹啉拖尾因子越大,柱金屬雜質含量越大。
4.氫鍵作用(CFA):阿米替林是堿性化合物,在酸性或中性條件下呈離子態,保留因子較小,保留主要依靠氫鍵作用,阿米替林保留因子越大,柱氫鍵作用越強。